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相似文献
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1.
转EPSPS基因抗草苷膦油菜基因漂移的初步研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
草苷膦是一种广谱内吸传导型除草剂[1].草苷膦通过竞争性抑制植物莽草酸代谢过程中磷酸烯醇式丙酮酸莽草酸-3-磷酸合酶(简称为EPSPS)活性,阻断芳香族氨基酸的生物合成导致植物死亡[2].因此,转EPSPS基因(来自微生物的基因)作物对草苷膦类型的除草剂具有抗性.在1996~2004年的9年间,抗除草剂生物技术产品一直占市场的主导地位.2004年,全球种植的抗除草剂的转基因作物有油菜、大豆、玉米及棉花等,种植面积共计有5,860万公顷,占全球转基因作物总种植面积(8,100万公顷)的72%.抗除草剂油菜品种在国外已广泛种植,据国际农业生物技术应用服务组…  相似文献   

2.
为了阐明大豆Glycine max(L.)Merr.胼胝质合酶在大豆抵御大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus,SMV)侵染过程中的关键作用,采用生物信息学方法在大豆中鉴定出24个胼胝质合酶,并挑选出受一氧化氮(NO)影响且参与SMV抗性调控的大豆胼胝质合酶Glyma.08G308200(GmGSL7c).使用RT-qPCR验证了清除NO的大豆植株中基因GmGSL7c的表达情况,并借助基于烟草脆裂病毒(TRV)介导的基因沉默(VIGS)技术沉默GmGSL7c基因.结果发现,GmGSL7c的沉默影响了叶片中SMV诱导的胼胝质积累,在沉默植株未被接种的上位叶中可检测到SMV外壳蛋白基因SMV-CP并观察到发病症状,表明GmGSL7c基因的沉默抑制了大豆对SMV的抗性,为进一步研究大豆与SMV间互作的抗病信号通路奠定了基础.  相似文献   

3.
目的:探讨内皮型一氧化氮合酶基因多态性与妊高征的相关性.方法:应用PCRRFLP技术检测了12例正常女性的内皮型一氧化氮合酶基因第7外显子.结果:发现12例正常女性中有4例的基因型是eNOS/GG,有8例的基因型是eNOS/GT,未检测到eNOS/TT型的个体.等位基因A1(eNOS/G)的频率为66.7%,等位基因A2(eNOS/T)的频率为33.3%.结论:广东女性人群存在内皮型一氧化氮合酶第7外显子BanⅡ酶切位点遗传多态性.  相似文献   

4.
基于同源序列克隆技术,从花椰菜中克隆了查尔酮合酶(chalcone synthase;CHS)基因cDNA全长,将该基因成功转入花椰菜,经过Basta抗性筛选,PCR鉴定,得到7株花椰菜转基因过表达阳性植株.转基因花椰菜的核盘菌胁迫分析显示,与对照花椰菜相比,在病原胁迫的不同时期,转基因植株中BoCHS基因的表达量显著上升,且随着胁迫时间的增加,该基因表达量均增高,且在36 h时达到最大值,表明转基因花椰菜通过过量表达CHS来增强自身对菌核病的抗性,使植株对菌核病的抗性明显增强.与查尔酮合酶在油菜、向日葵、烟草等中的抗病作用一致,表明花椰菜BoCHS基因也是抗菌核病的重要基因.  相似文献   

5.
aroA基因的克隆和优化   总被引:9,自引:0,他引:9  
除草剂草甘膦 (glyphosate ,N_phosphonomethylglycine )的靶标酶是由aroA基因编码的EPSP (5_烯醇式丙酮酰莽草酸_3_磷酸 ,5_enolpyruvylshikimate_3_phosphate)合成酶。采用先进的基因优化技术 ,以鼠伤寒沙门氏杆菌和大肠杆菌的EPSP合成酶基因为模板 ,通过随机结合 ,交错延伸的PCR扩增过程 ,克服定点突变的局限性 ,使基因获得多位点突变 ,并使之在大肠杆菌中得到表达。对纯化后的表达产物的酶动力学性质的测定结果表明 ,获得了与作为模板的野生型相比 ,具有高得多的酶活力 (降低的Km (PEP) )和大大增强的草甘膦抗性 (升高的Ki(glyphosate) )的突变基因  相似文献   

6.
以乙酰乳酸合酶(ALS)为靶标的除草剂是目前生产中应用较为广泛的除草剂,具有用量少、选择性强、杀草谱广、生物活性高,对哺乳动物毒性低的特点.本研究对水稻ALS编码基因进行了定点突变,获得了突变基因OsALS~(C512A),实现了第171位脯氨酸残基成为组氨酸残基(Pro171His);然后构建了其过表达载体,并转化拟南芥进行了除草剂抗性检测.对分属四类的四种除草剂的生测结果显示,突变后的水稻ALS赋予了转基因拟南芥对双草醚、甲基二磺隆和五氟磺草胺的抗性,但是没有赋予对普施特的抗性.研究结果对于进一步开展水稻抗ALS靶标除草剂的基因编辑以及获得抗除草剂新种质有一定的指导意义.  相似文献   

7.
为在大肠杆菌中融合表达汉滩病毒囊膜糖蛋白G1与NP含主要抗原位点的片段 .将汉滩病毒 76 118株S基因编码区 5′端约 0 .7kb的片段与M基因编码G1的片段连接 ,克隆入 pGEX 4T2 ,构建嵌合基因原核表达载体 pGEX 4T2 S 0 .7G1,在大肠杆菌XL1 Blue中诱导GST S0 .7G1融合蛋白的表达 .表达产物用ELISA和Westernblot进行鉴定 .限制性内切酶酶切鉴定证明 ,成功构建了嵌合原核表达载体 pGEX 4T2 S0 .7G1.经IPTG诱导后 ,ELISA活性测定结果表明 ,该融合蛋白可与抗汉坦病毒NPmAb特异性结合 .Westernblot结果显示 ,诱导出相对分子质量 (Mr)大于 1× 10 5的S0 .7G1与GST的融合蛋白 ,并有一系列大小不等的可与抗汉坦病毒NPmAb特异性结合的蛋白带 .获得具有特异性结合活性的融合蛋白GST S0 .7G1,为汉滩病毒基因工程疫苗的研制奠定了基础  相似文献   

8.
白叶枯病是由革兰氏阴性黄单孢菌水稻变种(Xanthomonas oryzae pv.Oryzae,Xoo)所引起的一种世界性水稻细菌病害.水稻Xa7基因是一个具有广谱抗性的显性抗白叶枯病基因.通过对水稻抗病品种IRBB7(含Xa7)和感病对照IR24接种白叶枯菌PX086,发现:在叶片的病原菌侵染部位,IRBB7比IR24的活性氧(H2O2和O2-)积累更快且含量更高;与活性氧代谢相关的酶,如超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、抗坏血酸过氧化物酶和过氧化物酶的活性也更高.推测活性氧的代谢调节可能在Xa7基因介导的抗病反应中起作用.  相似文献   

9.
探讨重组诱导型一氧化氮合酶基因转染血管平滑肌细胞及产生的一氧化氮对血管平滑肌细胞增殖的影响。将诱导型一氧化氮合酶基因通过真核表达载体转入血管平滑肌细胞中 ,用Griess法测定转染细胞生成的一氧化氮的量。观察转染后平滑肌细胞生长状态情况 ,用流式细胞仪分析细胞周期的变化。结果正常细胞组NO的含量为78.4 4± 1 5 .38,而iNOS转染组NO含量为 2 36 .5 7± 31 .83,两组相比有非常显著差异 (P =0 .0 0 0 ,n =6 ) ,血管平滑肌细胞转染后生成一氧化氮。转染后的平滑肌细胞生长明显受到抑制 ,主要抑制平滑肌细胞周期G1 S期的过渡 ,使细胞停留在G1期。说明血管平滑肌细胞可以成功转染iNOS基因 ,生成的一氧化氮可明显抑制平滑肌细胞的增殖 ,为从血管非内皮成分进行iNOS基因转染提供了实验研究的依据  相似文献   

10.
为了探讨蔷薇科植物MLO基因在抗白粉病中的作用,研究应用病毒诱导的基因沉默技术(virus induced gene silencing,VIGS)抑制了大花香水月季RgMLO6基因和长尖叶蔷薇RlMLO7基因的表达,随后接种白粉菌对这2个基因进行抗性鉴定. 研究发现在VIGS载体转化植株叶片20 d后,RgMLO6和RlMLO7基因的相对表达量显著下降了80%~90%,沉默效果明显. 分别对2个基因沉默后的嫩叶进行白粉病抗性鉴定,大花香水月季和长尖叶蔷薇的抗性水平较对照组均提高. 显微镜观察白粉菌接种2个基因沉默后植株叶片中菌丝体的生长情况,整体表现出沉默植株叶表皮细胞上的白粉菌生长较对照组生长缓慢. 结果表明RgMLO6与RlMLO7基因对蔷薇科植物的白粉病有负向调控作用.  相似文献   

11.
定向进化包括随机基因文库生成、基因在合适宿主中的表达和筛选目标特性变体. EvolvR作为一种CRISPR介导的新型定向进化技术,可以使目标序列在一天内完成整个进化过程. 目前,EvolvR只报导用于抗性基因的突变,以及串联最多2个sgRNAs以扩大突变窗口长度. 本研究旨在探究EvolvR系统在酶基因序列定向进化中的适用性以及突变效率, 同时在此基础上扩大EvolvR的突变窗口长度. 该研究结果表明,将4个能高效表达的单个sgRNA 串联,成功检测到靶向同一基因的3个不同靶位点,证明了EvolvR具有在目标基因区域大范围制造突变的潜力,具有很高的应用价值. 本研究为利用EvolvR系统对目标酶基因实现定向进化的研究奠定了基础.  相似文献   

12.
A system for the continuous directed evolution of biomolecules   总被引:1,自引:0,他引:1  
Esvelt KM  Carlson JC  Liu DR 《Nature》2011,472(7344):499-503
  相似文献   

13.
IntroductionWith the development of molecular biology,thetheory of evolution is being developed andchanged,especially at the molecular level.Theobjective of this research was to try to understandthe force behind sequence evolution and the rulesof evolution.The development of bioinformaticshas made itpossible to study the sequences directlyinstead of relying on complicated experiments.In the end of the1 96 0 s,Kimura and Ohta,and King and Jukes proposed the neutral theory ofmolecular evolutio…  相似文献   

14.
Adams KL  Daley DO  Qiu YL  Whelan J  Palmer JD 《Nature》2000,408(6810):354-357
A central component of the endosymbiotic theory for the bacterial origin of the mitochondrion is that many of its genes were transferred to the nucleus. Most of this transfer occurred early in mitochondrial evolution; functional transfer of mitochondrial genes has ceased in animals. Although mitochondrial gene transfer continues to occur in plants, no comprehensive study of the frequency and timing of transfers during plant evolution has been conducted. Here we report frequent loss (26 times) and transfer to the nucleus of the mitochondrial gene rps10 among 277 diverse angiosperms. Characterization of nuclear rps10 genes from 16 out of 26 loss lineages implies that many independent, RNA-mediated rps10 transfers occurred during recent angiosperm evolution; each of the genes may represent a separate functional gene transfer. Thus, rps10 has been transferred to the nucleus at a surprisingly high rate during angiosperm evolution. The structures of several nuclear rps10 genes reveal diverse mechanisms by which transferred genes become activated, including parasitism of pre-existing nuclear genes for mitochondrial or cytoplasmic proteins, and activation without gain of a mitochondrial targeting sequence.  相似文献   

15.
很多microRNA (miRNA)基因在基因组上紧密排列形成miRNA基因簇,mir-430是目前已发现的最大miR-NA基因簇,但其起源和进化方面却是未知的.为了揭示mir-430基因簇的起源及其在相关物种的进化关系,文中基于miRNA序列同源保守的特点,采用BLAST程序在NCBI基因数据库中搜索mir-430序列,在14个物种中共搜索到35个mir-430基因序列,这14个物种都为硬骨鱼类.多序列对比发现mir-430基因簇成熟序列的第2到第8位碱基以及第16到第22位碱基为保守序列.进化分析表明七鳃鳗的pma-mir-430基因可能是此基因家族最早出现的基因形式,并且pma-mir-430e可能是其他物种mir-430基因的祖先基因.祖先基因经过个别碱基的缺失及突变、串联重复和大片段重复等方式形成了mir-430基因簇.该研究通过分析不同物种中mir-430基因簇的特征,揭示mir-430基因簇的分子进化规律,为其调控网络和功能研究提供理论基础.  相似文献   

16.
作者从芸苔(Brassica campestris)中用RT-PCR方法获得了EPSPs基因的cDNA.与其他物种中的EPSPs基因进行了比对和分析发现:芸苔EPSPs基因的cDNA与欧洲油菜的同源性最高,为93%,与水稻同源性最低,仅为64%.将芸苔EPSPs的ORF片段插入到GTK融合表达载体中,为EPSPs的原核表达奠定了基础。  相似文献   

17.
The colour patterns decorating butterfly wings provide ideal material to study the reciprocal interactions between evolution and development. They are visually compelling products of selection, often with a clear adaptive value, and are amenable to a detailed developmental characterization. Research on wing-pattern evolution and development has focused on the eyespots of the tropical butterfly Bicyclus anynana. There is quantitative variation for several features of eyespot morphology but the actual genes contributing to such variation are unknown. On the other hand, studies of gene expression patterns in wing primordia have implicated different developmental pathways in eyespot formation. To link these two sets of information we need to identify which genes within the implicated pathways contribute to the quantitative variation accessible to natural selection. Here we begin to bridge this gap by demonstrating linkage between DNA polymorphisms in the candidate gene Distal-less (Dll) and eyespot size in B. anynana.  相似文献   

18.
K Chada  J Magram  F Costantini 《Nature》1986,319(6055):685-689
During the evolution of the beta-globin family gene in vertebrates, different globin genes acquired different developmental patterns of expression. In mammals, specific 'embryonic' beta-like globins are synthesized in the earliest erythroid cells, which differentiate in the yolk sac of the embryo. In most mammals the embryonic globin chains are replaced by 'adult' beta-globins in fetal and adult erythrocytes, which arise in the liver and bone marrow, respectively. However, in simian primates (including humans), a distinct 'fetal' type of beta-like globin chain predominates in fetal erythroid cells. Based on the pattern of DNA sequence homologies between different mammalian species, these fetal globin genes, G gamma and A gamma, are thought to have descended from an ancestral gene, 'proto-gamma', which was embryonic in its pattern of expression. In the mouse, as well as in most other mammalian species, the descendants of the proto-gamma gene continue to function as embryonic genes. To investigate the evolutionary changes that led to the 'fetal recruitment' of the gamma-globin genes in primates, we have introduced the cloned human G gamma-globin gene into the mouse germ line. We report here that the human G gamma gene reverts to an embryonic pattern of expression in the developing mouse. This observation suggests that during evolution a shift occurred in the timing of expression of a trans-acting signal controlling the proto-gamma gene.  相似文献   

19.
G F Temple  A M Dozy  K L Roy  Y W Kan 《Nature》1982,296(5857):537-540
A human tRNALys gene was converted to an amber suppressor by site-specific mutagenesis of the anticodon. The mutated tRNALys gene directed synthesis of a tRNA that suppressed the UAG amber nonsense mutation in beta O thalassemia mRNA. Such genes may be used to detect other nonsense mutations in mammalian cells and may provide an approach to gene therapy for beta O thalassaemia due to nonsense mutations.  相似文献   

20.
酶定向进化是模拟自然进化过程、用于改造酶性质的一种新策略.在以易错PCR为代表的无性进化技术基础之上,有性进化技术的发展使酶定向进化更接近于自然进化过程.与此同时为解决巨大容量的突变文库与有限的筛选技术之间的矛盾,许多新的高通量筛选方法不断涌现,大大加快了酶定向进化技术的发展.文章从构建高质量的突变基因文库和选择有效的高通量筛选方法两方面,详细总结了近几年出现的新技术并对其应用情况进行介绍.  相似文献   

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