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以运动发酵单胞菌(Zymomonas mobilis)的总DNA为模板,PCR扩增运动发酵单胞菌中的丙酮酸脱羧酶( Pyruvate decarboxylase,PDC)基因和乙醇脱氢酶Ⅱ(Alcohol dehydrogenaseⅡ,ADHⅡ)基因.将丙酮酸脱羧酶基因和含核糖体结合位点(RBS)的乙醇脱氢酶基因串联起来置于T7启动子控制下,构成多顺反子表达质粒pQR-PRA.经酶切和PCR验证,表达载体构建成功.将pQR-PRA转入大肠埃希菌(Escherichia coli)BL21中,转化子的定性检测表明有酶表达,并且初步测定了2种酶的表达量. 相似文献
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运动发酵单胞菌乙醇脱氢酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达 总被引：5，自引：0，他引：5
采用PCR技术,以基因组DNA为模板克隆得到运动发酵单胞菌(Zyrnomonas mobilis)乙醇脱氢酶(alcohol dehydrogenaseⅡ)基因adhB,连接到表达载体pSE380上,得到重组质粒pSE-adhB。将此重组质粒转化到大肠杆菌菌株DH5α中,重组菌株经IPTG诱导后,在乙醛指示平板检测到乙醇脱氢酶活性。SDS-PAGE电泳结果显示出明显的40KD特异性蛋白质条带。重组菌株经诱导培养,每毫升发酵液酶活力为5u。 相似文献
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以运动发酵单胞菌(Zymomonas mobilis)CP4基因组DNA为模板,采用PCR技术克隆得到其丙酮酸脱氢酶基因(pdc)同源下游p3片段,并连接到广谱宿主载体pBBR1MCS3-Ppdc-ldhL中构建了重组质粒pBBR1MCS3-Ppdc-ldhL-p3,将此重组质粒转化到受体菌Z.mobilis CP4中,分别以Ppdc和p3片段作为同源上游和下游片段,利用同源双交换重组技术将重组质粒中的ldhL基因置换了Z.mobilis染色体中的pdc基因,得到重组菌株Z.mobilis CP4(△pdc∷ldhL).测得重组菌株乳酸产量为10.8g/L,明显高于出发菌株,说明初步成功构建了产L-乳酸的运动发酵单胞菌代谢工程菌株. 相似文献
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目的：研究热休克蛋白对增加大肠杆菌抗逆性和乙醇产量的影响。方法：运用基因工程技术,用大肠杆菌的Lac启动子、运动发酵单胞菌的丙酮酸脱羧酶基因（pdc）和乙醇脱氢酶基因（adhB）,构建可以在大肠杆菌中表达的Lac-AP操纵子。Lac-AP操纵子导入大肠杆菌,可使大肠杆菌发酵糖生产乙醇。再用来自超嗜热菌强烈火球菌（Pyrococcus furiosus）的小分子热休克蛋基因（sHsp）,构建在大肠杆菌中表达的Lac-APH操纵子。结果：成功地构建了耐高温产生乙醇的大肠杆菌LAPH和LAP,它们发酵后乙醇的产量分别为11.5g/L、7.9g/L,而对照菌LH的产量只有为0.5g/L。与对照菌LH相比,LAPH和LAP的产量分别提高了23倍和15.8倍。结果证明：与对照LAP相比,热休克蛋白使菌种LAPH的45℃温度耐受性提高15.75倍、50℃温度耐受性提高40.7倍,乙醇的产量增高高达4.74倍。结论：研究表明,小分子热休克蛋白的表达,可使细菌在致死温度下的存活率显著提高,耐受温度明显增强,乙醇产量显著提高。 相似文献
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木糖是木质纤维素原料水解液中的第二大组分,木糖和葡萄糖的充分利用是有经济性地生产纤维素乙醇的关键。通过基因克隆手段构建了一株可以高效利用木糖产乙醇的重组运动发酵单胞菌Zymomonas mobilis TSH01,并进行了利用单糖溶液、混合糖溶液及玉米秸秆水解液发酵产乙醇效率的研究。结果表明,利用单一葡萄糖或单一木糖溶液发酵时,当糖浓度为8%、发酵72 h后,糖利用率分别为100%和98.9%,乙醇代谢收率分别为87.8%和78.3%;利用8%葡萄糖和8%木糖的混合溶液发酵时,72 h后,葡萄糖和木糖的利用率分别为98.5%和97.4%,乙醇代谢收率为94.9%。利用含3.2%葡萄糖和3.5%木糖的玉米秸秆水解液发酵72 h后,葡萄糖和木糖的利用率分别为100%和92.3%,乙醇代谢收率为91.5%。此外,磷酸二氢钾对发酵过程中木糖利用率以及乙醇收率的提高有明显促进作用。 相似文献
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代谢工程改造运动发酵单胞菌用于提高乙醇产量 总被引：1，自引：0，他引：1
目的:采用可以在运动发酵单胞菌中表达的操纵子构建重组运动发酵单胞菌,用于提高该细菌对高温高糖的耐受性和提高乙醇产量.方法:用外来的YfdZ、MetB和Hsp构建的多顺反子质粒,转化运动发酵单胞菌而使其获得新的代谢途径.在玉米水解液中,验证了该多顺反子质粒对运动发酵单胞菌产生乙醇的影响.结果:与对照菌相比,在37℃和糖浓度为28%的培养条件下,该基因工程菌的乙醇产量提高到183.2%.在37℃,糖浓度为28%并添加氮源的条件下,该基因工程菌的乙醇产量提高到148.0%.结论:YfdZ、MetB及Hsp三种基因的共同作用能显著提高运动发酵单胞菌的乙醇产量和发酵温度. 相似文献
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Mulchand S. Patel Natalia S. Nemeria William Furey Frank Jordan 《The Journal of biological chemistry》2014,289(24):16615-16623
The pyruvate dehydrogenase complexes (PDCs) from all known living organisms comprise three principal catalytic components for their mission: E1 and E2 generate acetyl-coenzyme A, whereas the FAD/NAD+-dependent E3 performs redox recycling. Here we compare bacterial (Escherichia coli) and human PDCs, as they represent the two major classes of the superfamily of 2-oxo acid dehydrogenase complexes with different assembly of, and interactions among components. The human PDC is subject to inactivation at E1 by serine phosphorylation by four kinases, an inactivation reversed by the action of two phosphatases. Progress in our understanding of these complexes important in metabolism is reviewed. 相似文献
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应用PCR定点突变技术把质粒pESOD中人铜锌超氧化物歧化酶基因(hCu,Zn-SOD)的Cys111密码子突变为Ala111密码子,再构建重组子,通过随机同源重组将突变后的hCu,Zn-SOD整合入聚球藻Synechococcussp.PCC7942,并实现表达。表达产物用SDS-PAGE、Western blot、酶活等方法测定均为阳性反应;热稳定性测定显示,hCu,Zn-SOD在80℃保温30min后仍具有95%的活力,耐热能力比天然hCu,Zn-SOD有了较大的提高。蛋白扫描结果显示目的蛋白占可溶性蛋白的3.61%。 相似文献
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Phosphorus (P) is widely considered to be the main nutrient limiting the productivity of freshwater phytoplankton, but an assessment of its bioavailability in natural samples is highly complex. In an attempt to provide a novel tool for this purpose, the promoter of the alkaline phosphatase gene, phoA, from Synechococcus sp. PCC 7942 was fused to the luxAB luciferase genes of the bioluminescent bacterium Vibrio harveyi. The resulting construct was introduced into a neutral site on the Synechococcus sp. PCC 7942 genome to yield strain APL, which emitted light when inorganic P concentrations fell below 2.3 μM. Light emission of P‐deprived cells decreased rapidly upon inorganic P readdition. The reporter was demonstrated to be a sensitive tool for monitoring the bioavailability of both inorganic and organic P sources. In water samples taken from a natural freshwater environment (Lake Kinneret, Israel), the luminescence measured correlated with total dissolved phosphate concentrations. 相似文献
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单细胞蓝藻（Ｓｙｎｅｃｈｏｃｏｃｕｓｓｐ．ＰＣＣ７９４２）以５０μｍｏｌ／ＬＺｎ２＋诱导８ｄ后收集,破碎取上清液经凝胶过滤、离子交换层析及反相ＨＰＬＣ纯化得到类金属硫蛋白,产率为每升培养液收集１．５ｇ鲜藻,得２．５ｍｇ纯品．其单体分子量为８７５０,Ｎ未端测定为缬氨酸,氨基酸组成分析得每分子（５６个氨基酸）含１０个半胱氨酸,疏水氨酸较多,且含有芳香族氨基酸,原子吸收光谱测得每分子蛋白结合４个二价金属．以上表明,该种类金属硫蛋白与哺乳动物金属硫蛋白结构差异很大,可能只是一种进化上的趋同． 相似文献
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为了考察聚球藻7942在混养条件下的能量利用效率,分别以葡萄糖和乙酸为碳源开展了聚球藻7942的混养培养研究,并在此基础上利用代谢通量分析方法对聚球藻7942混养条件下的碳代谢和能量利用进行了探讨。结果表明:葡萄糖和乙酸均能促进藻细胞生长,且乙酸促进藻细胞生长的作用更为明显;葡萄糖利用可明显增加藻细胞糖酵解途径中碳代谢流量,而乙酸利用则导致糖酵解途径中碳代谢流量减小,两种有机碳源均增加了柠檬酸循环中碳代谢流量;有机碳源导致藻细胞光化学效率下降,而葡萄糖较之乙酸降低藻细胞光化学效率更为明显。虽然混养条件下光能的贡献率要小于光自养,但基于能量的细胞得率和能量转换率均高于光自养,光自养和以葡萄糖、乙酸为碳源的混养中基于ATP生成的能量转换效率分别为6.81%、7.43%和8.77%。 相似文献
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Nahoko Takahashi Masayoshi Tamura Susumu Kajiwara Kazuhisa Ohtaguchi 《Biotechnology letters》1999,21(9):751-757
A novel cyanobacterial vector, pTT201, containing the bar gene encoding resistance to herbicides, bialaphos and phosphinothricin, was constructed. In Synechococcus sp. strain PCC7942-SPc, the bar gene was successfully expressed. Plasmid pTT201 increased a minimum inhibitory concentration for bialaphos 16-fold over Synechococcus sp. strain PCC7942-SPc without pTT201. The combination of the bialaphos as a selective agent and the transformation by bar gene serves as a photostable selection system for Synechococcus. 相似文献
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代谢通量分析是研究微藻光自养培养过程中CO2和光能利用的一个非常有用的工具。本研究建立了聚球藻7942光自养培养代谢网络,并通过代谢通量方法分析了不同入射光强下的碳代谢流分布和能量代谢。研究结果表明,CO2固定是代谢能量和还原力消耗的主要途径,分别约占总消耗能量的85%和70%。研究还发现在一定光强范围,基于ATP生成的细胞得率和最大细胞得率基本维持不变,分别约为2.80g/molATP和2.95g/molATP,但基于总吸收光能的细胞得率和对应的光能转换效率则随着光强的增加而降低。 相似文献
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The phosphate-uptake behaviour of a sphX mutant of the cyanobacterium Synechococcus leopoliensis (Raciborski) Komarek, strain PCC 7942 has been studied. This mutant lacks the high-affinity phosphate-binding protein that
is abundantly expressed under phosphate-deficient growth conditions. The following observations have been made: (i) The mutant
is still capable of utilizing phosphate at nanomolar external concentrations. (ii) Elimination of the sphX gene leads to an increase in the Michaelis constant and the maximum velocity of the initial influx of 32P-phosphate. (iii) The capacity of the wild type to adapt within a few minutes to a transitory increase in the external phosphate
concentration in an energetically efficient way (G. Falkner et al. 1994, C R Acad Sci Paris, Life sciences 317: 535–541) is
lost in the mutant. As a result, the mutant can no longer attain pulse-adapted states that reflect in a characteristic way
preceding exposures to higher phosphate concentrations.
Received: 6 February 1998 / Accepted: 8 May 1998 相似文献
